style="width:11.29339in;height:7.47318in" /> 本文是学习GB-T 32951-2016 有机肥料中土霉素、四环素、金霉素与强力霉素的含量测定 高效液相色谱法. 而整理的学习笔记,分享出来希望更多人受益,如果存在侵权请及时联系我们
在再现性条件下，获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过再现性限R,
有机肥中土霉素、四环
素、金霉素、强力霉素添加浓度范围及再现性方程见表2。
GB/T 32951—2016
(资料性附录)
土霉素、四环素、金霉素、强力霉素标准物质液相色谱图
土霉素、四环素、金霉素、强力霉素标准物质液相色谱图见图 A.1。
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图 A.1 土霉素、四环素、金霉素、强力霉素标准物质液相色谱图
GB/T 32951—2016
(资料性附录)
有机肥料中土霉素、四环素、金霉素和强力霉素含量的测定
高效液相色谱串联质谱法
B.1 说明
本附录给出了基体较复杂的有机肥料(如豆饼肥)中土霉素、四环素、金霉素和强力霉素的含量测定
方法供参考，方法检出限为土霉素10μg/kg, 四环素10μg/kg, 金霉素10μg/kg,
强力霉素10μg/kg。
B.2 原理
试料中土霉素、四环素、金霉素和强力霉素经提取、净化处理后进样，高效液相色谱质谱检测器测
定，标准加入法定量。
B.3 试剂和材料
除另有说明外，所有试剂均为分析纯，水为 GB/T6682
规定的一级水。本方法中所用到其他试剂
同第4章试剂和材料。
B.3.1 甲醇：色谱纯。
B.3.2 乙腈：色谱纯。
B.3.3 甲 酸(CH₂O₂): 色谱纯。
B.3.4 乙 酸 铵(CH₃COONH₄): 色谱纯。
B.3.5 0.5 mol/L 乙酸铵：称取38.54 g 乙酸铵，用水溶解，定容至1000
mL。
B.3.6 0.2% 甲酸溶液(含0.5 mmol/L 乙酸铵):取甲酸2.0 mL 置 于 1 0 0
0 mL 容量瓶中，同时移取
0.5 mol/L 乙酸铵(见 B.3.5)1.0 mL置该容量瓶中，加水稀释至刻度。
B.3.7 土霉素、四环素、金霉素、强力霉素混合标准溶液：分别取5 mL
土霉素、四环素、金霉素、强力霉 素标准储备液(见4. 16)至100 mL
容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，混匀，每种物质浓度为100μg/mL, 储
存于冰箱中，每周配制。
B.4 仪器和设备
B.4.1 液相色谱仪：配质谱检测器。
B.4.2 同 第 5 章 。
B.5 分析步骤
B.5.1 提取
称取过筛的肥料粉末1.0 g～2.0g, 精确至0.1 mg。 提取步骤同7.2。
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B.5.2 净化
准确移取经 B.5.1 步骤得到的试料提取液1.0 mL 置于25 mL
容量瓶中，加水稀释至刻度。准确移 取该稀释液5 mL, 以 1 mL/min
的速度通过已活化处理的固相萃取柱。依次用5 mL 水，5 mL 甲醇-水
淋洗固相萃取柱，弃去全部流出液。减压抽干5 min, 用 5 mL
草酸-甲醇溶液洗脱目标物。洗脱液使用 饱和NaOH 溶液调至pH
约为5～6,置于氮气吹干仪上室温下吹至近干，用1mL 流动相(见B.5.3.1b)]溶
解残渣，过0.22 μm 滤膜，待测定。
同时按照上述步骤准备空白样品提取液用以配制标准曲线。
B.5.3 测定
B.5.3.1 液相色谱串联质谱参考条件
推荐的液相色谱串联质谱参考条件如下：
a) 色谱柱：极性包埋 C18 键合硅胶柱，C18,1.9μm,2.1 mm×100 mm
或相当者；
b) 流动相：A:0.2% 甲酸溶液(含0.5 mmol/L 醋酸铵);B:
乙腈；流动相比例：A:B=7:3;
c) 流速：0.30 mL/min;
d) 柱温：25℃;
e) 进样量：10μL;
f) 离子化模式：电喷雾电离(ESI), 正离子模式；
g) 喷雾电压：4000 V;
h) 鞘气压力：241 kPa;
i) 辅助气流量：5 L/min;
j) 离子传输管温度：350℃;
k) 雾化温度：275℃;
1) 碰撞气压力：氩气，0.2 Pa;
m) 扫描模式：选择反应监测(SRM),
选择反应监测母离子、子离子和碰撞能量见表 B.1。
表 B.1 母离子、子离子和碰撞能量表
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B.5.3.2 工作曲线
分别从土霉素、四环素、金霉素、强力霉素混合标准溶液(见
B.3.7)中取适量溶液，用样品空白提取
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液稀释定容，该系列混合标准溶液浓度为：2 ng/mL、5 ng/mL、10 ng/mL、20
ng/mL、50 ng/mL、
B.5.3.3 测定
按照B.5.3.2 配制系列混合标准溶液，以浓度和响应峰面积值为x 轴、y
轴绘制工作曲线，外标法定 量测定经 B.5. 1 、B.5.2
提取净化后的试样。测试液中土霉素、四环素、金霉素、强力霉素的响应值均应在
仪器测定的线性范围内，否则应重新调整浓度后测定。随试样测定进行空白试验和平行试验。
B.6 分析结果的计算和表述
试料中被测组分的含量 X, 数值用微克每千克(μg/kg) 表示，按式(B. 1)
计算：
style="width:4.05322in;height:0.61336in" /> ………… …………… (B.1)
式中：
c;—— 从工作曲线得到的被测组分溶液浓度的数值，单位为纳克每毫升(ng/mL);
co—— 空白试验值，单位为纳克每毫升(ng/mL);
V— 试液定容体积的数值，单位为毫升(mL);
m—— 试料质量的数值，单位为克(g);
K- 稀释因子。
计算结果保留两位有效数字，取平行测定结果的算术平均值作为测定结果。
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